Imunofluorescência

Técnicas - As reações imunológicas que envolvem a ligação antígeno-anticorpo podem ser visualizadas ou quantificadas por meio de diferentes marcadores para o antígeno ou para o anticorpo.

Imunofluorescência Indireta - Princípios do Teste

Antígenos expressos em células ou tecidos são fixados em uma superfície/lâmina (fase sólida). O soro do paciente é então adicionado na superfície para que anticorpos contra o antígeno pesquisado se liguem, formando um sítio de ligação antígeno-anticorpo.

Em uma segunda etapa, anticorpos marcados com fluoresceína e direcionados contra os anticorpos do paciente são adicionados a superfície, de modo que se liguem aos anticorpos do paciente. A fluoresceína é um fluoróforo que produz uma marcação visível ao se utilizar um microscópio de fluorescência.

A intensidade da marcação é proporcional a quantidade de anticorpos presentes na amostra do paciente. Assim, amostras positivas podem ser tituladas em etapas. 

Vantagens do Teste de Imunofluorescência Indireta

• Alta especificidade: amostras positivas e negativas produzem ampla diferença de intensidade de fluorescência

• O espectro completo dos antígenos presentes no substrato original está disponível, permitindo assim a detecção de um grande número de anticorpos, atingindo uma taxa muito maior de detecção.

• Permite a detecção simultânea de anticorpos contra diversos antígenos bioquimicamente diferentes em um único substrato.

DIAGNOSTICO POR ELISA TRAMMIT MEDICAL

TÉCNICA ELISA

Cobertas com antígenos puros são usadas como fase sólida contendo antígenos.

A Microplaca ELISA

O teste de ELISA baseia-se em reações antígeno-anticorpo detectáveis por meio de reações enzimáticas (teste imunoenzimático).
A enzima mais comumente usada nesta prova á a peroxidase, responsável por catalisar a reação de desdobramento da água oxigenada (H2O2) em H2O mais O2.

Princípio do teste

O antígeno purificado fica aderido aos poços da microplaca de poliestireno (fase sólida). Em seguida, adiciona-se o soro do paciente e, caso a amostra seja positiva, anticorpos específicos se ligam aos antígenos da fase sólida.

Na segunda etapa, inclui-se um segundo anticorpo dirigido contra as imunoglobulinas da espécie, que é ligado à peroxidase (conjugado).

Ao adicionar-se o substrato apropriado para a enzima, ocorre a reação de cor. Os orifícios onde ocorreu a reação antígeno-anticorpo apresentam uma coloração. A intensidade da cor produzida é proporcional à concentração de anticorpos na amostra de soro.

Vantagens

• ELISA monoespecífico (imunoensaio enzimático com um único antígeno) proporciona material in-vitro quantitativo para detecção de anticorpos. O perfil de ELISA proporciona um material in-vitro semiquantitativo para detecção de diferentes anticorpos em uma única microplaca.

• A fase sólida do Pool ELISA é coberta com uma composição de antígenos para detecção semiquantitativa de anticorpos cuja especificidade deve ser investigada em sequência através de material monoespecífico.

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